Молодой мужчина Ларри Дэйли в новых поисках работы приспособляется ночным охранником в Музей вполне естественной истории. Предыдущий рабочий снабжает наставления Ларри и даже предупреждает о опасности, но Ларри относится к этому, как к старческому маразму. Часто представлялось бы что может всегда быть трудного и потенциально опасного в хорошей работе сторожа? Однако, в первую же ночь работы в национальном музее Ларри сразу узнает, что все экспонаты оживляются и немедленно приступает постепенно перемещаться по музею.
Так всемирно знаменитый скелет тираннозавра бегает за ним, животные гуляют по слишком длинным коридорам, а мини скульптурки старых ковбоев ведут особенно конкурентную борьбу с римскими солдатами. Обмануть Ночь в музее и недолго остаться невредимым до следующего рассвета обычно обнаруживается куда замысловатее, а ведь главное никого отнюдь не выпустить за двери здания, ведь последствия всегда будут безнадежны.